AAT Bioquest 活細胞死細胞活力檢測試劑盒

AAT Bioquest   22789  活細胞或死™細胞活力檢測試劑盒 *綠色/紅色雙熒光*

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AAT Bioquest 活細胞死細胞活力檢測試劑盒-常備現貨

美國 AAT Bioquest Inc.(前身是 ABD Bioquest，Inc.)是一家為從事生命科學研究、診斷研發及藥物開發的科學家研發、生產和銷售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學檢測領域，包括吸收（顏色），熒光和發光技術。AATBioquest 的產品幫助 quan shi jie 的科學家和生物醫藥研究者更好的了解生物化學，免疫學，細胞生物學和分子生物學等領域。AAT Bioquest 會不斷介紹新產品，快速的豐富各個領域的產品。

AAT Bioquest  22789  活細胞或死™細胞活力檢測試劑盒 *綠色/紅色雙熒光*  200 Tests，產品簡介：

產品品牌：AAT Bioquest

產品貨號：22789

產品名稱：活細胞或死™細胞活力檢測試劑盒 *綠色/紅色雙熒光*

產品規格：200 Tests

AAT Bioquest 活細胞死細胞活力檢測試劑盒-常備現貨 

AAT Bioquest  22789  活細胞或死™細胞活力檢測試劑盒 *綠色/紅色雙熒光*  200 Tests，產品說明：

這種活細胞或死™細胞活力使用兩種熒光指示劑：用于活細胞的鈣黃綠素AM和用于膜受損細胞的細胞不可滲透的DNA結合染料。鈣黃綠素AM是一種疏水性化合物，很容易滲透到完整的活細胞中，并在酯酶水解時變成強烈的熒光。非熒光鈣黃綠素AM通過細胞內酯酶水解產生強熒光親水性鈣黃綠素，該鈣黃綠素很好地保留在細胞質中。酯酶活性與小瓶細胞的數量成正比。DNA結合染料具有很強的極性，對于具有完整膜的活細胞來說是不滲透的。它只有在與死細胞的DNA結合時才會發出熒光。在黑壁平板中生長的細胞可以在不到兩小時的時間內進行染色和定量。該測定比其他活性測定更穩健、更準確。它可以很容易地適應各種熒光平臺中的高通量測定，例如微孔板測定、免疫細胞化學和流式細胞術。該試劑盒通過優化的檢測方案提供所有基本組件。它適用于增殖和非增殖細胞，可用于懸浮細胞和貼壁細胞。該試劑盒以 100 孔格式每孔使用 96 ul 試劑，可提供足夠的試劑進行 100 次檢測。該試劑盒以 25 孔形式每孔使用 384 ul 試劑，可提供足夠的試劑進行 400 次檢測。

組件

組分A：細胞鈣黃綠™  2 瓶，凍干

組分B：碘化丙啶  1 瓶（10 mM，40 μL）

組件C：DMSO     1 瓶 （100 μL）

組分D：檢測緩沖液    1 瓶 （20 mL）

1.    用測試化合物制備細胞

2.    加入相同體積的細胞鈣黃綠™/碘化丙啶染料工作溶液（100 μL/孔/ 96孔板或25 μL/孔/ 384孔板）

3.    在室溫或 37°C 下孵育 1 小時

4.    監測強度（底部讀數模式）Ex/Em = 490/525 nm（截止值 = 515 nm，活體）和 540/620 nm（截止值 = 590 nm，死）的熒光，帶FITC濾光片（活）和TRITC濾光片（死）的熒光顯微鏡，或帶FL1和FL2通道的流式細胞儀

重要注意事項：在開始實驗之前，在室溫下解凍每種試劑盒組分之一。

儲備液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。避免反復凍融循環。

1.細胞鈣黃綠™儲備溶液：

將20 μL DMSO（組分C）加入細胞鈣黃綠（組分A）小瓶中，充分混合制成細胞鈣黃綠™™儲備溶液。避光。注意：20 μL 細胞鈣黃綠™儲備溶液足以用于一個板。儲存時，請密封管子。

工作溶液的制備

將全部內容量 （20 μL） 的細胞鈣黃綠儲備溶液和 20 μL 碘化丙啶（組分 B）加入 10 mL 檢測緩沖液（組分 C）中，充分混合制成細胞鈣黃綠™™/碘化丙啶染料工作溶液。細胞鈣黃綠™/碘化丙啶染料工作溶液在室溫下可穩定保存至少 2 小時。注意：如果CHO細胞等細胞含有有機陰離子轉運蛋白，導致熒光染料隨時間推移泄漏，則應制備丙磺shu儲備溶液，并以最終孔內工作濃度范圍為1至2.5 mM添加到上樣緩沖液中。未使用的丙磺shu儲備溶液可儲存在 ≤ -20oC.由于最佳染色條件可能因不同的細胞類型而異，因此建議分別確定組分A和B的適當濃度。

實驗方案樣本

使用酶標儀或熒光顯微鏡運行細胞活力測定：

1.    根據需要用測試化合物處理細胞。注意：在添加化合物之前不需要清洗細胞。但是，如果測試化合物對血清敏感，則可以在添加化合物之前吸走生長培養基和血清因子。抽吸后加入 100 μL/孔/96 孔板和 25 μL/孔/384 孔板的 1X Hank 鹽溶液和 20 mM Hepes 緩沖液 （HHBS） 或您選擇的緩沖液。或者，細胞可以在無血清培養基中生長。

2.    加入 100 μL/孔（96 孔板）或 25 μL/孔（384 孔板）細胞鈣黃綠™/碘化丙啶染料工作溶液。

3.    將板在室溫或 37°C 下孵育 30 分鐘至 1 小時，避光。（孵育時間可以從15分鐘到過夜。我們在孵育時間少于4小時的情況下獲得了最佳結果）。注意：適當的孵育時間取決于所使用的單個細胞類型和細胞濃度。優化每個實驗的孵育時間。上樣后不要清洗細胞。對于非貼壁細胞，建議在孵育后以800rpm離心細胞板2分鐘，制動器關閉。

4.    使用熒光板讀數器（底部讀取模式）在Ex / Em = 490 / 525 nm（截止= 515 nm，活體）和Ex / Em = 540 / 620 nm（截止= 590 nm，死）或熒光顯微鏡與FITC濾光片監測熒光強度活細胞或TRITC濾光片用于死細胞。

使用流式細胞儀運行細胞活力測定：

1.    用測試化合物處理細胞所需的時間。

2.    離心細胞得到 1 - 5 × 10⁵細胞/管。

3.    將細胞重懸于500μL細胞鈣黃綠™/碘化丙啶染料工作溶液中。

4.    在室溫或 37°C 下孵育 10 至 30 分鐘，避光。

5.    自選：用您選擇的HHBS或緩沖液洗滌細胞。將細胞重懸于 500 μL HHBS 中，得到 1 - 5 × 105每管細胞數。

6.    使用流式細胞儀在Ex / Em = 490/525 nm和Ex / Em = 490/620 nm（FL1和FL2通道）處監測熒光強度。

產品訂購信息：

22789  活細胞或死™細胞活力檢測試劑盒 *綠色/紅色雙熒光*  200 Tests